Диагностическая ценность наборов реагентов для выявления и определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis и Ureaplasma spp.

О.В. Заручейнова1, М.А. Зима2, А.В. Закревская1, В.Н. Вербов1, Л.Б. Куляшова1.
  • 1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, г. Санкт-Петербург, Россия.
  • 2ООО "Экология здоровья" МЦ "Ситимед", г. Челябинск, Россия.

Микоплазменные инфекции, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы Mycoplasma hominis (M. hominis) и Ureaplasma spp., занимают одно из ведущих мест среди воспалительных заболеваний урогенитального тракта. M. hominis и Ureaplasma spp. могут вызывать такие распространенные заболевания, как негонококковые уретриты, эндометриты и бактериальные вагинозы. При поражении микоплазменной инфекцией верхних отделов урогенитального тракта могут происходить нарушения репродуктивной функции – невынашивание беременности, бесплодие. Урогенитальные микоплазмы также могут быть причиной преждевременных родов, рождения детей с малым весом и заражением крови. Лабораторные методы играют решающую роль в диагностике микоплазменных инфекций в связи с отсутствием четких клинических проявлений, широким распространением бессимптомного носительства и частым сочетанием микоплазм и уреаплазм с другими инфекционными агентами. Несмотря на широкое использование в настоящее время полимеразной цепной реакции (ПЦР, ПЦР Real-time), культуральный метод (КМ) продолжает оставаться "золотым стандартом" диагностики микоплазменных инфекций. Он позволяет не только с высокой чувствительностью и специфичностью выявлять возбудитель, но и оценивать его количественное содержание в исследуемом материале, а также определять чувствительность выделенных штаммов к антибактериальным препаратам. Предварительное определение антибиотикочувствительности при назначении лечения позволяет снизить удельный вес положительных результатов при повторном обследовании после курса антибиотикотерапии. Считается, что клинически значимый титр для M. hominis и Ureaplasma spp. составляет 104 КОЕ/мл. Это обусловлено тем, что микоплазмы в количестве 103 КОЕ/мл и менее могут обнаруживаться у здоровых людей.

Отделом Новых Технологий ФБУН НИИЭМ им. Пастера были разработаны следующие наборы реагентов: для выявления M. hominis и Ureaplasma spp. ("Микоплазма-50", "Уреаплазма-50"), для выявления и определения антибиотикочувствительности M. hominis и Ureaplasma spp. ("Микоплазма-АЧ-12", "Уреаплазма-АЧ-12"). В основе наборов реагентов "Микоплазма-50", "Уреаплазма-50", "Микоплазма-АЧ-12", "Уреаплазма-АЧ-12" лежит использование селективных питательных сред для выявления либо M. hominis, либо Ureaplasma spp. Селективные питательные среды обеспечивают оптимальные условия для роста урогенитальных микоплазм при подавлении роста других микоплазм, грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемых образцах. Наборы "Микоплазма-АЧ-12", "Уреаплазма-АЧ-12" разработаны в виде микротест-систем. В лунках стрипов, входящих в состав данных двух наборов, сорбированы антибиотики различных групп, которые зарегистрированы на территории РФ и используются в лечении микоплазменных инфекций практикующими врачами. Каждый антибактериальный препарат сорбирован в лунки стрипов в одной концентрации, позволяющей оценивать чувствительность урогенитальных микоплазм в двух категориях: чувствительные или резистентные.

Целью настоящего исследования стало:

  1. сравнение выявляемости M. hominis и Ureaplasma spp. методом ПЦР и КМ при использовании разработанных нами наборов реагентов для выявления и определения антибиотикочувствительности урогенитальных микоплазм;
  2. определение характера чувствительности клинических изолятов M. hominis и Ureaplasma spp. на основе разработанных наборов реагентов.

Исследование проводилось на клиническом материале, полученном от 277 пациентов, обратившихся для амбулаторного обследования в Медицинский Центр ФБУН НИИЭМ им. Пастера, г. Санкт-Петербург. Также исследовали клинический материал, полученный от 129 пациентов, обратившихся для амбулаторного обследования в Медицинский Центр "Ситимед", г. Челябинск. Из них 84 образца проверяли только КМ, а 45 – методом ПЦР и КМ.

Обследование клинического материала на наличие ДНК Ureaplasma spp. и M. hominis проводили методом ПЦР Real-time с использованием наборов реагентов "АмплиСенс" (ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, г. Москва). Реакцию амплификации и учет результатов проводили на устройстве "АНК-32" (Россия). Культуральная диагностика клинического материала в МЦ ФБУН НИИЭМ им. Пастера (г. Санкт-Петербург) проводилась с использованием наборов реагентов "Микоплазма-50" и "Уреаплазма-50". Культуральная диагностика клинического материала в МЦ "Ситимед" (г. Челябинск) проводилась с использованием наборов реагентов "Микоплазма-АЧ-12" и "Уреаплазма-АЧ-12", которые позволили определить характер чувствительности выявленных клинических изолятов M. hominis и Ureaplasma spp. к 12 антибактериальным препаратам.

В результате исследования клинического материала 277 человек (г. Санкт-Петербург) методом ПЦР Ureaplasma spp. были обнаружены у 59 (21,3 %) человек, M. hominis – у 3 (1,1 %) человек, а оба возбудителя: M. hominis и Ureaplasma spp. - у 23 (8,3 %) человек. Выявление КМ только Ureaplasma spp. наблюдалось в 68 (24,6 %) случаях, M. hominis были обнаружены в 1 (0,4 %) случае, а оба возбудителя (M. hominis и Ureaplasma spp.) были обнаружены у 9 (3,3 %) человек.

Общее обнаружение Ureaplasma spp. в клиническом материале составило 82 (29,6 %) случая при использовании метода ПЦР (95 % ДИ по методу Клоппера-Пирсона 24,3 % - 35,4 %) и 77 (27,8 %) случаев при исследовании КМ (95 % ДИ 22,6 % - 33,5 %). Достоверно значимых различий не выявлено [χ2=0,22; р=0,639]. Общее обнаружение M. hominis методом ПЦР составило 26 (9,4 %) случаев (95 % ДИ 6,2 % - 13,4 %), а КМ – 10 (3,6 %) случаев (95 % ДИ 1,7 % - 6,5 %). Значимость различий составила [χ2=7,61; р=0,0058]. Общее совпадение результатов между двумя методами при обнаружении Ureaplasma spp. составило 97,5 %. При исследованиях на M. hominis общее совпадение результатов составило 93,5 %.

Клинический материал 129 человек (г. Челябинск) только культуральной диагностикой исследовали для 84 образцов, из которых в 28 (33,3 %) случаях наблюдалось общее выявление Ureaplasma spp. (95 % ДИ 23,4 % - 44,5 %), а в 3 (3,6 %) случаях была выявлена M. hominis (95 % ДИ 0,7 % - 10,1 %).

Методом ПЦР и КМ проверяли 45 образцов. В результате исследования методом ПЦР Ureaplasma spp. были обнаружены у 29 (64,4 %) человек (95 % ДИ 48,8 % - 78,1 %), а КМ – у 20 (44,4 %) человек (95 % ДИ 29,6 % - 60,0 %). Достоверно значимых различий не выявлено [χ2=3,63; р=0,057]. Выявление M. hominis методом ПЦР наблюдалось у 4 (8,9 %) человек (95 % ДИ 2,5 % - 21,2 %), а КМ – у 2 (4,4 %) человек (95 % ДИ 0,5 % - 15,1 %). Достоверно значимых различий не выявлено [χ2=0,71; р=0,398]. Общее совпадение результатов между двумя методами при обнаружении Ureaplasma spp. составило 80,0 %. При исследованиях на M. hominis общее совпадение результатов составило 95,6 %.

По результатам культуральной диагностики с применением наборов "Микоплазма-АЧ-12" и "Уреаплазма-АЧ-12" клинического материала у 129 человек общее обнаружение M. hominis составило 5 (3,9 %) случаев, из которых количество резистентных штаммов к джозамицину составило 2 (40 %) случая, к мидекамицину и линкомицину – 1 (20 %) случай. К остальным из двенадцати антибиотикам (доксициклину, тетрациклину, офлоксацину, ципрофлоксацину, пефлоксацину, спарфлоксацину, левофлоксацину, моксифлоксацину и клиндамицину) клинические изоляты M. hominis оказались чувствительны. Общее обнаружение Ureaplasma spp. у 129 человек составило 48 (37,2 %) случаев, из которых количество резистентных штаммов к азитромицину составило 26 (54,2 %) случаев, к эритромицину – 25 (52,1 %), к рокситромицину – 13 (27,1 %), к мидекамицину – 12 (25,0 %), к кларитромицину – 6 (12,5 %), к левофлоксацину – 11 (22,9 %), к спарфлоксацину – 7 (14,6 %), к офлоксацину – 4 (8,3 %), к моксифлоксацину – 3 (6,25 %), к джозамицину – 3 (6,25 %), к доксициклину – 1 (2,1 %), а к тетрациклину – 2 (4,2 %). 7 (14,6 %) штаммов Ureaplasma spp. оказались резистентны ко всем двенадцати антибиотикам.

Таким образом, проведенные исследования показали, что наборы, разработанные в ФБУН НИИЭМ им. Пастера, для культуральной диагностики Ureaplasma spp. и M. hominis и определения их антибиотикочувствительности обладают высокой диагностической ценностью. Они обеспечивают высокий процент совпадения результатов с методом ПЦР.

Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий