Материалы и методы

Были обследованы 54 больных с впервые выявленным ТБ легких до начала специфической противотуберкулезной терапии находившихся в стационаре Санкт-Петербургского Городского противотуберкулезного диспансера и ЦНИИТ РАМН с сентября 2011 по май 2012 года. Обследованы также 43 здоровых донора и группа контактных по ТБ лиц (n=47), в которую были включены сотрудники стационаров противотуберкулезных учреждений со стажем работы более 1 года. У 65 % больных имел место инфильтративный ТБ легких, у 13 % – фиброзно-кавернозный ТБ. Оставшиеся 22 % составили больные с казеозной пневмонией (6 %), очаговым ТБ (6 %), диссеминированным ТБ (6 %) и туберкулемой (4 %). Всем лицам, включенным в исследование (n=144), был выполнен КФТ. Тест проводили строго согласно инструкции производителя. Образцы цельной крови (1000 мкл), стабилизированной гепарином (50 ед./мл), культивировали при 37 °С в течение 18 - 24 часов в присутствии антигенов микобактерий (антигениндуцированная продукция, AG) в нулевой контрольной пробирке (отрицательный контроль, NIL) и в пробирке c митогеном (положительный контроль, MIT). После окончания культивирования отбирали плазму и определяли в ней количество IFNγ методом ИФА. Результаты оценивали с помощью программного обеспечения QFT 2.62, предоставленного производителем. Для конвертирования концентрации IFNγ из МЕ/мл в пг/мл использовали фактор 40 [4]. Результаты теста считали положительными, если разность между антигениндуцированной и спонтанной продукцией IFNγ составляла более 0,35 ME/мл (14 пг/мл), и разность между митогениндуцированной и спонтанной продукцией IFNγ – более 0,5 МЕ/мл (20 пг/мл). Помимо IFNγ мы определяли спонтанную и антигениндуцированную продукцию следующих цитокинов: эпидермального ростового фактора (EGF), макрофагального воспалительного протеина - 1β (MIP-1β), эндотелиального фактора роста (VEGF), интерлейкина-2 (IL-2), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-6 (IL-6), интерлейкина-1альфа (IL-1α), интерферона-альфа2 (IFN-α2), трансформирующего ростового фактора-альфа (TGFα), фактора некроза опухоли-альфа (TNFα), а также растворимого рецептора интерлейкина-2-альфа (sIL-2Rα) и растворимой формы лиганда CD40 (sCD40L). Исследования проводились с использованием наборов на магнитных частицах "Milliplex Mag" и анализатора "MagPix" ("Millipore", США) по технологии xMap. Также у 48 обследуемых определяли содержание IP-10 иммуноферментным методом с использованием набора реагентов "Bender Medsystems" (Вена, Австрия).

При статистических расчетах анализировали значения спонтанной продукции исследуемых биомаркеров (NIL), антигениндуцированной продукции (AG) и разности между ними (AG-NIL). Для обработки полученных данных использовали пакеты программ MS Excel, Prizm 5.0 (GraphPad Software Inc.), JMP 9.0. Полученные данные представлены в виде медианы с указанием первого и третьего квартиля Me [Q1; Q3]. Для сравнения парных количественных значений использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Для оценки диагностической ценности и выбора порогового значения применяли анализ характеристической кривой (receiver-operating-characteristic curve-ROC) с вычислением площади под характеристической кривой операционной характеристики (ППК) c указанием 95 % доверительного интервала (ДИ). Для корреляционного анализа рядов данных использован метод ранговой корреляции по Спирмену. С целью нахождения оптимальной комбинации биомаркеров был применен метод построения классификационных деревьев решений.

Выбрать другой раздел данной публикации
Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий