Апробация наборов для выявления Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis и определения их антибиотикочувствительности

Заручейнова О.В., Закревская А.В., Куляшова Л.Б., Рока В.В., Вербов В.Н.
  • ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург.

Среди заболеваний, передающихся половым путем, все большее значение приобретают воспалительные процессы, этиологическим агентом которых выступают условно-патогенные бактерии и грибы, являющиеся составной частью нормального биоценоза урогенитального тракта. Наиболее значимыми среди них являются микоплазменные инфекции, к возбудителям которых относят Mycoplasma hominis (M. Hominis) и Ureaplasma urealyticum (U. Urealyticum). В настоящее время выявление M. Hominis и U. Urealyticum осуществляют культуральным методом и методом ПЦР (ПЦР Real-time). Клинически значимым является обнаружение M. Hominis и U. Urealyticum в количестве 104 КОЕ/мл. Предварительное определение чувствительности к антибактериальным препаратам при назначении лечения микоплазменных инфекций позволяет снизить удельный вес положительных результатов при повторном обследовании после курса антибиотикотерапии.

Культуральная диагностика микоплазменных инфекций на селективных средах позволяет не только идентифицировать возбудителя, провести количественную оценку его содержания, но и определить антибиотикочувствительность исследуемых штаммов. Для этих целей в нашей стране используют как импортные тест-системы («Micoplasma Ist» фирмы «BioMerieux»; «Micoplasma DUO», «Micoplasma SIR» фирмы «Bio-Rad»; «MYCOFAST» фирмы «EliTech»), так и отечественные («Уро-тест», производства НПО «Иммунотэкс»).

Цель исследования: проведение сравнительного анализа метода ПЦР и культуральной диагностики M. Hominis и U. Urealyticum на разработанных наборах, позволяющих проводить полуколичественную оценку титра микроорганизмов и определение их антибиотикочувствительности; оценка диагностической ценности разработанных наборов по сравнению с тест-системами зарубежных аналогов.

Исследование проводилось на клиническом материале, полученном от 305 пациентов (мужчин и женщин), обратившихся для амбулаторного обследования в Медицинский Центр ФБУН НИИЭМ им. Пастера, г. Санкт-Петербург. Выделение M. Hominis и U. Urealyticum методом ПЦР Real-time проводилось на наборах «АмплиСенс», г. Москва. Применяли ДНК-амплификатор АНК-32 (Россия). Культуральное выявление M. Hominis и U. Urealyticum в селективных питательных средах проводилось на наборах «Микоплазма-50» и «Уреаплазма-50», производства ФБУН НИИЭМ им. Пастера. На основании положительных результатов ПЦР 26 клинических изолятов M. Hominis и 25 изолятов U. Urealyticum параллельно исследовали на наборах «Микоплазма-АЧ», «Уреаплазма-АЧ» и «Уреа/Мико-Скрин-АЧ», производства ФБУН НИИЭМ им. Пастера, и «Mycofast Evolution 3» фирмы «EliTech» (Франция) и «Mycoplasma IST 2» фирмы «BioMerieux» (Франция).

В основе наборов «Микоплазма-50», «Уреаплазма-50», «Микоплазма-АЧ», «Уреаплазма-АЧ» лежит использование селективных питательных сред для выявления либо M. Hominis, либо U. Urealyticum. В наборе «Уреа/Мико-Скрин-АЧ» используется универсальная питательная среда для выявления и M. Hominis, и U. Urealyticum. Наборы «Микоплазма-АЧ», «Уреаплазма-АЧ» и «Уреа/Мико-Скрин-АЧ» разработаны в виде микротест-систем, подобно зарубежным аналогам, в лунках стрипов которых сорбированы антибиотики различных групп, которые зарегистрированы на территории РФ и используются в лечении микоплазменных инфекций практикующими врачами.

Результаты: совпадение результатов исследований культуральным и ПЦР методом при обнаружении U. Urealyticum составило 95,9 %. Только в 4,1 % случаев наблюдалось расхождение в результатах исследований: в 3 пробах положительный ответ при культуральном исследовании и отсутствие ДНК возбудителя при использовании метода ПЦР, и в 1 пробе наоборот. При идентификации M. Hominis положительный результат, полученный методом ПЦР, был подтвержден культуральным методом в 71,0 % случаев, и в 29,0 % случаев наблюдалось расхождение результатов: положительный ответ метода ПЦР при отрицательном культуральном исследовании. Роста культуры на питательной среде выявлено не было при отрицательных результатах методом ПЦР.

При сравнении наборов для выявления и определения антибиотикочувствительности M. Hominis была выделена в 100 % случаев на питательной среде набора «Микоплазма-АЧ», в 88,5 % на универсальной среде в наборе «Уреа/Мико-Скрин-АЧ», как и на среде набора «Mycofast Evolution 3», и всего в 73,1 % случаев на питательной среде набора «Mycoplasma IST 2». Изоляты U. Urealyticum были выделены в 100 % случаев на питательной среде набора «Уреаплазма-АЧ», результаты для наборов «Уреа/Мико-Скрин-АЧ» и «Mycoplasma IST 2» совпали и составили 96%, а выделение U. Urealyticum на питательной среде набора «Mycofast Evolution 3» наблюдалось в 92 % случаев. По определению чувствительности к антибактериальным препаратам также наблюдались некоторые несовпадения, вероятно связанные с тем, что концентрации в лунках исследуемых наборов для нескольких антибиотиков различались, как различается состав антибиотиков для каждого набора. Результаты исследования можно было интерпретировать только для четырех антибиотиков (доксициклин, офлоксацин, ципрофлоксацин и джозамицин) к M. Hominis, и для четырех антибиотиков (доксициклин, офлоксацин, азитромицин и джозамицин) к U. Urealyticum.

Таким образом, проведенное нами сравнительное исследование культурального метода с использованием разработанных ФБУН НИИЭМ им. Пастера наборов и метода ПЦР для идентификации U. Urealyticum и M. Hominis выявило высокий процент совпадения результатов, особенно в отношении U. Urealyticum. Проведенные испытания показали, что разработанные наборы ФБУН НИИЭМ им. Пастера, как и тест-системы зарубежных аналогов, обладают высокой диагностической ценностью.

Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий