Разработка и апробация наборов реагентов для выявления и определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis и Ureaplasma spp.

УДК 579.61. О.В. Заручейнова, А.В. Закревская, Л.Б. Куляшова, В.В. Рока, В.Н. Вербов.
  • Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, г. Санкт-Петербург, Россия.

Единой точки зрения о роли M. Hominis и Ureaplasma spp. в воспалительных заболеваниях урогенитального тракта в настоящее время нет. Показатели инфицированности микоплазмами населения также разноречивы. Тем не менее, с M. Hominis и Ureaplasma spp. связывают негонококковые уретриты, воспаления органов малого таза, эндометриты, сальпингиты и бактериальные вагинозы. Они могут вызывать преждевременные роды, случаи мертворождения, рождения детей с малым весом и клиническими проявлениями заражения крови. В настоящее время выявление M. Hominis и Ureaplasma spp. осуществляют культуральным методом и методом полимеразной цепной реакции (ПЦР, ПЦР Real-time). Чувствительность и специфичность метода ПЦР составляют 96% и 98% соответственно. Культуральная диагностика микоплазменных инфекций на селективных средах позволяет не только выявлять возбудителя, проводить количественную оценку его содержания, но и определять антибиотикочувствительность исследуемых штаммов. Для этих целей в нашей стране используют как импортные тест-системы «BioMerieux»; «Mycoplasma DUO», «Mycoplasma SIR» фирмы «Bio-Rad»; «MYCOFAST» фирмы «EliTech»), так и отечественные («Уро-тест», производства НПО «Иммунотэкс»). Клинически значимым является обнаружение микоплазм в количестве 104 КОЕ/мл, а при его превышении необходимо проводить антибиотикотерапию.

Целью настоящего исследования стало:

  1. разработка наборов реагентов для выявления и определения антибиотикочувствительности M. Hominis и Ureaplasma spp. культуральным методом;
  2. сравнение выявляемости урогенитальных микоплазм в диагностических титрах при использовании метода ПЦР и культурального метода;
  3. оценка диагностической ценности разработанных наборов по сравнению с тест-системами зарубежных аналогов.

Отделом Новых Технологий ФБУН НИИЭМ им. Пастера было разработано три набора реагентов для выявления M. Hominis и Ureaplasma spp. («Микоплазма-50», «Уреаплазма-50», «Уреа/Мико-Скрин-2») и три набора реагентов для выявления M. Hominis и Ureaplasma spp. и определения их антибиотикочувствительности («Микоплазма-АЧ-12», «Уреаплазма-АЧ-12», «Уреа/Мико-Скрин-АЧ»). Исследование проводилось на клиническом материале, полученном от 305 пациентов (184 мужчин, 121 женщин), обратившихся для амбулаторного обследования в Медицинский Центр ФБУН НИИЭМ им. Пастера.

Клинический материал был обследован на наличие ДНК Ureaplasma spp. и M. Hominis методом ПЦР Real-time, для чего использовали наборы реагентов «АмплиСенс» производства ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, г. Москва. Реакцию амплификации и учет результатов проводили на устройстве «АНК-32», Россия. Культуральная диагностика клинического материала проводилась на наборах реагентов «Микоплазма-50» и «Уреаплазма-50». На основании положительных результатов ПЦР 26 изолятов M. Hominis и 25 изолятов Ureaplasma spp. исследовали на наборах «Микоплазма-АЧ-12», «Уреаплазма-АЧ-12», «Уреа/Мико-Скрин-АЧ» и «Уреа/Мико-Скрин-2» нашего производства, и наборах «Mycofast Evolution 3», Франция, а также «Mycoplasma IST 2», Франция.

В основе наборов «Микоплазма-50», «Уреаплазма-50», «Микоплазма-АЧ-12», «Уреаплазма-АЧ-12» лежит использование селективных питательных сред для выявления либо M. Hominis и Ureaplasma spp. В наборах «Уреа/Мико-Скрин-АЧ» и «Уреа/Мико-Скрин-2» используется универсальная питательная среда для одновременного выявления и M. Hominis, и Ureaplasma spp. Питательные среды обеспечивают оптимальные условия для роста урогенитальных микоплазм при подавлении роста других микоплазм, грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемых образцах. Наборы «Микоплазма-АЧ-12», «Уреаплазма-АЧ-12», «Уреа/Мико-Скрин-АЧ» и «Уреа/Мико-Скрин-2» разработаны в виде микротест-систем. В лунках стрипов, входящих в состав первых трех наборов, сорбированы антибиотики различных групп, которые зарегистрированы на территории РФ и используются в лечении микоплазменных инфекций практикующими врачами.

Проведенное исследование показало, что частота выявления Ureaplasma spp. значительно выше, чем M. Hominis и составляет 31,47 % методом ПЦР, 29,84 % культуральным методом. Обнаружение M. Hominis составило 13,11 % методом ПЦР, а культуральным методом 7,87 %. Встречаемость Ureaplasma spp. была выше у женщин, чем у мужчин. По результатам ПЦР: 48,76 % (59 от 121 женщин) против 20,11 % (37 от 184 мужчин) соответственно. По результатам культурального исследования: 41,32 % (50 от 121 женщин) против 14,67 % (27 от 184 мужчин) соответственно. Существенных различий по полу не выявлено в частоте выявления для M. Hominis. По результатам ПЦР: 18,18 % (22 от 121 женщин) против 9,78 % (18 от 184 мужчин) соответственно. По результатам культурального исследования: 9,09 % (11 от 121 женщин) против 7,06 % (13 от 184 мужчин) соответственно. При сравнении результатов двух методов по выявлению Ureaplasma spp. и M. Hominis можно отметить высокий процент совпадения результатов (97,70 % и 94,10 %, соответственно). При сравнении результатов по выделению Ureaplasma spp. и M. Hominis, а также по определению их антибиотикочувствительности на диагностических наборах от различных производителей также можно отметить высокий процент совпадения результатов.

Таким образом, проведенные исследования показали, что наборы, разработанные в ФБУН НИИЭМ им. Пастера, для культуральной диагностики Ureaplasma spp. и M. Hominis и определения их антибиотикочувствительности обладают высокой диагностической ценностью. Они обеспечивают высокий процент совпадения результатов с методом ПЦР и наборами зарубежных производителей.

Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий