Разработка алгоритма иммунологической диагностики туберкулеза легких

Е.В. Васильева, В.Н. Вербов, Арег А. Тотолян.
  • ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург.

Для предупреждения распространения туберкулеза (ТБ) большое значение имеет своевременная и достоверная диагностика. Перспективным направлением для совершенствования методов клинической диагностики туберкулеза является идентификация биомаркеров в венозной крови. Цель исследования – поиск информативных иммунологических маркеров и разработка алгоритма, позволяющего дифференцировать активный ТБ легких от латентной туберкулезной инфекции (ЛТБИ).

В исследование были включены больные впервые выявленным туберкулезом легких до начала специфической противотуберкулезной терапии, здоровые доноры и группа контактных лиц, имеющих длительный контакт с больными ТБ. Всем лицам, включенным в исследование, определяли содержание в плазме крови неоптерина (IBL, Германия), специфических антител класса IgG (ПТА) (ИФА-анти-ТУБ, Россия) и выполняли "QuantiFERON-TB Gold In-Tube" (КФТ). Помимо IFNγ мы определяли спонтанную (NIL) и антигениндуцированную (AG) продукцию 12 аналитов (EGF, MIP-1β, VEGF, IL-2, IL-4, IL-6, IL-1α, IFNα2, TGFα, TNFα, sIL-2Rα, sCD40L) с помощью технологии xMap ("Millipore", США) и IP-10 иммуноферментным методом (Bender Medsystems, Австрия). Для статистической обработки полученных данных использовали пакеты программ MS Excel, SPSS (версия 13.0), Prizm 5.0 (GraphPad Software Inc.), JMP 9.0.

Установлено, что для диагностики инфицирования КФТ является наиболее информативным тестом. При дифференциальной диагностике латентной и активной туберкулезной инфекции наибольшей значимостью обладает выявление ПТА, после чего следует НПТ. Специфичность КФТ для решения этой задачи ничтожна. В результате проведения мультиплексного анализа было установлено, что IP-10AG-NIL и IL-2AG-NIL могут служить биомаркерами, альтернативными IFNγAG-NIL, которые позволяют работать в более широком диапазоне определяемых концентраций и при более высоких пороговых значениях. Построение дерева решений в программе JMP 9.0 позволило выбрать три наиболее значимых маркера: IFNγAG-NIL, TGFαNIL и IL-6AG, комбинированное определение которых позволило выявить 96,3 % (26 из 27) случаев активного туберкулеза и 80,7 % (21 из 26) случаев ЛТБИ.

На основании полученных результатов нами предложен двухступенчатый алгоритм иммунологической диагностики ТБ. На первом этапе предлагается проводить количественное измерение специфической продукции IFNγ, IP-10 или IL-2, тем самым выявляя контингент лиц, инфицированных микобактериями. На втором этапе, для определения активности туберкулезного процесса, применять комбинацию IFNγ, TGFα и IL-6 или определять содержание НПТ и ПТА в сыворотке крови.

Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий