Применение поляризационного флуоресцентного иммуноанализа с использованием синтетических пептидов ESAT-6 для определения антител в сыворотке крови больных туберкулезом легких

Е.В. Васильева, В.Н. Вербов, С.А. Еремин, И.А. Перемолотова, А.А. Колобов, Арег А. Тотолян.

Метод поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА) является одним из современных и перспективных видов иммуноанализа. Главные его достоинства - экспрессность, высокая чувствительность и специфичность, малое количество исследуемого образца, отсутствие стадии пробоподготовки, полная автоматизация качественного и количественного анализа. За рубежом ПФИА хорошо известен и широко используется как для мониторинга лекарственных средств, так и в контроле за употреблением наркотических и одурманивающих веществ. Упоминания о разработке ПФИА для диагностики туберкулеза (ТБ) у людей к настоящему времени не встречается. Цель работы заключалась в изучении возможностей применения ПФИА при разработке тестов для диагностики ТБ.

Результаты

Методом компьютерного моделирования иммунодоминантный белок Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 был разбит на фрагменты с областью перекрывания 9 аминокислотных остатков. Для выделенных фрагментов были синтезированы 18 пептидов. Длина каждого пептида составляла 13 - 15 аминокислотных остатков. На основе полученных пептидов были получены трейсеры с флуоресцеинизотиоционатом.

После проведения очистки методом ТСХ было выделено по одной основной фракции из каждой реакционной смеси с Rf 0,01, подобрано оптимальное разведении трейсера и сыворотки, и проведен ПФИА с положительным и отрицательным пулом сывороток крови больных туберкулезом на основании результатов ИФА с применением рекомбинантного белка ESAT-6. В результате были выбраны 7 трейсеров, для которых разница между поляризацией положительного и отрицательно пула была максимальна, и повторили анализ с отдельными сыворотками. Результаты тестирования выявили трейсер, применение которого при выбранном пороговом значении позволило правильно идентифицировать 7 из 10 больных (чувствительность 70 %) и 9 из 10 здоровых (специфичность 90 %), p=0,011. Данный подход может быть использован для разработки экспресс-теста для диагностики ТБ.

Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий