Оценка выделения панели цитокинов при стимуляции мононуклеаров в диагностике туберкулёза

Несмотря на усилия по профилактике туберкулёза, это заболевание по-прежнему является одной из наиболее частых причин смертельных исходов во всём мире. Носителями возбудителя туберкулёза, Mycobacterium tuberculosis, являются до трети населения планеты. У 5 – 10 % носителей заболевание переходит в открытую форму, при этом они начинают выделять бактерии в окружающую среду.

Как при выявлении носительства, так и при диагностике открытой инфекции используется оценка выделения IFN-γ мононуклеарами в ответ на антигены микобактерий. Для этого проводится взятие крови с последующей инкубацией сыворотки в присутствии антигенов M. tuberculosis. В качестве антигена может использоваться туберкулин, ранний антиген ESAT-6, секретируемый в культуре белок CFP-10 или антиген TB7.7. После инкубации сыворотку исследуют на предмет содержания IFN-γ с помощью ИФА. Недостатком метода является подавление синтеза IFN-γ у пациентов с прогрессирующей туберкулёзной инфекцией. Сможет ли применение дополнительных маркеров сделать метод более чувствительным?

Чтобы выяснить это были исследованы сыворотки крови 21 пациента и 24 образа от здоровых добровольцев. IFN-γ ответ различался у пациентов и добровольцев при стимуляции антигенами ESAT-6, CFP-10, TB7.7, сочетанием ESAT-6+CFP-10 и сочетанием ESAT-6+CFP-10+TB7.7, но при стимулировании только TB7.7 различие было незначительным, хотя и достоверным. Выделение цитокинов, в том числе интерферона, при стимуляции смесью антигенов было более значительным.

Наиболее выраженным было различие ответа у пациентов и волонтеров по цитокинам IFN-γ, IL-2, IL-8 и IL-6, а также MCP-1, MIP-1β и MIP-1α. Уровень этих цитокинов в сыворотке пациентов резко возрастал при стимуляции разными сочетаниями антигенов. Оценка уровня IL-2, IL-6, IP-10 и MIP-1β после стимуляции позволила разделить две исследуемые группы. Для IP-10 и MIP-1β ответ всегда был значительно выше базового уровня.

Для удобства детекции множества цитокинов в лаборатории создали тест, основанный на связывании антигенов (в данном случае — цитокинов) на флуоресцентно-меченых гранулах, покрытых антителами, с последующей детекцией результата в проточной системе. Проведение такого мультиплексного теста занимает несколько часов, как и ИФА, но он позволяет единовременно оценить уровень множества мишеней в небольшом объёме материала.

оценка выделения панели цитокинов при стимуляции мононуклеаров

Kellar KL, Gehrke J, Weis SE, Mahmutovic-Mayhew A, Davila B, Zajdowicz MJ, Scarborough R, LoBue PA, Lardizabal AA, Daley CL, Reves RR, Bernardo J, Campbell BH, Whitworth WC, Mazurek GH. Multiple cytokines are released when blood from patients with tuberculosis is stimulated with Mycobacterium tuberculosis antigens. PLoS One. 2011;6(11):e26545.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий