Набор реагентов микоплазма - ач-4. Комплект № 1

Назначение набора микоплазма - ач-4

Набор реагентов микоплазма - ач-4 (комплект № 1) предназначен для одноэтапного обнаружения, идентификации, полуколичественной оценки титра и определения чувствительности Mycoplasma hominis (M. h.) к 4 антибиотикам (эритромицин, азитромицин, джозамицин, спирамицин), наиболее часто назначаемым при лечении урогенитальных микоплазмозов. Все антибиотики представлены в концентрациях, позволяющих оценить исследуемые штаммы M. h. как чувствительные или резистентные.

Комплект № 1 рассчитан на проведение 12 анализов, включая контроли.

См. статью: Антибиотики для лечения уреаплазмоза и микоплазмоза

Принцип метода

Питательная среда для выявления M. h. обеспечивает оптимальные условия для роста M. h. Селективные компоненты, входящие в состав среды, подавляют рост простейших, грибов, большинства представителей бактериальной флоры и других микоплазм, кроме M. h. В процессе роста M. h. в среде образуются щелочные продукты метаболизма, что проявляется в изменении цвета рН-индикатора от зелёного до фиолетового. Это позволяет проводить обнаружение, идентификацию и полуколичественную оценку титра M. h. по изменению цвета среды в тех лунках стрипов, на поверхности которых не сорбированы антибиотики.

Состав набора микоплазма - ач-4. Комплект № 1

  • 8-луночные стрипы с сорбированными антибиотиками - 12 шт.
  • Питательная среда для выявления M. h., лиофилизированная (10 мл) - 1 фл.
  • Масло вазелиновое - 1 фл.
  • Пробирки для микропроб - 18 шт.

Меры предосторожности при работе с набором микоплазма - ач-4

Потенциальный риск применения набора - класс 2а.

Набор микоплазма - ач-4 (комплект № 1) предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. Однако исследуемые клинические материалы, а также сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ними следует, соблюдая технику безопасности.

Следует избегать любого контакта компонентов набора со слизистыми оболочками.

При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

Оборудование и материалы для работы с набором микоплазма - ач-4

  • термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
  • дозаторы пипеточные;
  • горелка газовая (спиртовка);
  • вода дистиллированная;
  • транспортная среда для урогенитальных микоплазм.

Проведение анализа на базе набора микоплазма - ач-4

  • Приготовление пробирок с жидкой питательной средой

    Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выявления M. h. внести 10 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор зеленого цвета разлить по 0,54 мл в пробирки для микропроб (12 пробирок для приготовления инокулятов и 6 пробирок для контролей) и хранить при температуре 2 - 8 °С не более 7 сут. или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.

    Перед проведением анализа пробирки со средой выдержать при комнатной температуре (18 - 25 °С) в течение 1 ч. Раствор в пробирках должен быть прозрачным, зеленого цвета.

    В случае помутнения раствора или изменения его цвета пробирки со средой в работе не использовать!

  • Приготовление инокулята

    Инокулят готовят добавлением в пробирки с жидкой питательной средой для выявления M. h. следующих объемов исследуемой пробы:
    - для биопробы1 (отделяемое влагалища, отделяемое шейки матки, отделяемое уретры, сперма, центрифугат мочи), которая вносится с помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона (щетки) в пробирку, содержащую 0,5 мл транспортной среды для урогенитальных микоплазм - 60 мкл;
    - для пробы, оцененной как положительная по результатам анализа на жидких питательных средах - 60 мкл;
    - для пробы, оцененной как положительная по результатам анализа на плотной питательной среде - несколько колоний.

    1Методические указания от 11.03.2003 г. "Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований" МЗ РФ, Москва, 2003 г.

  • Проведение теста

    Ниже описана процедура для одного стрипа (см. рис. 1).

    В три лунки стрипа (с отрицательным К(-) и положительными К(+), К(++) контролями) внести по 90 мкл питательной среды для выявления M. h. (без пробы)2. Во все остальные пять лунок стрипа (с антибиотиками и К(+++)) внести по 100 мкл приготовленного инокулята, который перед внесеним перемешать встряхиванием. Из лунки с К(+++) перенести 10 мкл инокулята в лунку с К(++) и перемешать пипетированием. Затем из лунки с К(++) перенести 10 мкл инокулята в лунку с К(+) и перемешать пипетированием.

    Во все лунки стрипа добавить по 2 - 3 капли (50 - 75 мкл) вазелинового масла и стрип поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 24 - 72 ч.

    2Внимание! Пробирку с оставшейся питательной средой хранить при температуре 2 - 8 °С не более 7 сут. или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.

  • Учет и интерпретация результатов

    Для определения чувствительности штаммов M. h. к антибиотикам учет результатов проводить через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 72 ч.

    Изменения цвета среды в лунках стрипа оцениваются визуально: при изменении цвета "+", при отсутствии изменения цвета "-".

    Рис. 1. Схема расположения антибиотиков и контролей в лунках стрипа.

  • Качественный анализ

    Изменение окраски среды (без помутнения) в одной или нескольких лунках с положительными контролями К(+++), К(++) и К(+) при сохранении исходной зеленой окраски среды в лунке К(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе присутствует M. h., т.е. результат является положительным.

    Отсутствие изменений окраски среды (без помутнения) в лунках с положительными контролями К(+++), К(++) и К(+) по сравнению с окраской среды в лунке К(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе отсутствует M. h., т.е. результат является отрицательным.

    Помутнение среды в любой из контрольных лунок свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. В этом случае результаты учету не подлежат. Требуется повторное проведение анализа.

  • Полуколичественный анализ

    Изменение окраски среды только в лунке с К(+++) при отсутствии изменений в окраске среды в лунках К(++), К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. в исследуемой пробе составляет не более 102 колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл).

    Изменение окраски среды в двух лунках К(+++) и К(++) при отсутствии изменений в окраске среды в лунках К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. в исследуемой пробе составляет не более 103 КОЕ/мл.

    Изменение окраски среды в трех лунках К(+++), К(++) и К(+) при отсутствии изменения в окраске среды в лунке К(-) указывает на то, что титр M. h. в исследуемой пробе составляет не менее 104 КОЕ/мл.

  • Определение антибиотикочувствительности

    При изменении цвета среды "+" в лунках с антибиотиками штамм M. h. расценивается как резистентный (R). При отсутствии изменения цвета среды "-" - как чувствительный (S).

См. статью: Культуральная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза

Условия хранения и эксплуатации набора микоплазма - ач-4

  • Набор микоплазма - ач-4 (комплект № 1) следует хранить при температуре 2 - 8 °С в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 2 недель. Срок годности набора - 12 мес.
  • Приготовленную питательную среду можно хранить при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.
  • Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
  • По вопросам, касающимся качества набора микоплазма - ач-4 (комплект № 1), следует обращаться в ФГУН НИИЭМ имени Пастера Роспотребнадзора:
    адрес: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14;
    тел./факс: (812) 233-17-03, (812) 313-69-89;
    телефон (812) 325-27-10, (812) 313-69-88;
    веб-сайт: http://www.dntpasteur.ru;
    e-mail: pasteurdnt@yandex.ru.

Главная ::  Каталог "Селективные среды, добавки и тест-системы для выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности микроорганизмов" ::  Список инструкций

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий